簡單介紹在ELISA實(shí)驗(yàn)中對不同類型樣本的處理方法，ELISA實(shí)驗(yàn)中正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的第一步。
1、血漿
ELISA實(shí)驗(yàn)用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融，避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
2、 細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。)
3、 細(xì)胞裂解液
(1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用yi酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。(懸浮細(xì)胞可省略)
(2)收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
(3)加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
(4)將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。
(5)4℃10000×g離心10min，除去細(xì)胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。)
4、 血清
血清是常用于ELISA檢測的一類樣本，處理比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一晚上，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清大程度的析出)。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
小結(jié)： ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，故應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為保證檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本盡量在1~6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。(保證樣本不含NaN3，NaN3會(huì)抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。)
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